18052091425
应用简介
自噬与多种生理反应相关，比如肿瘤，炎症，免疫应答，氧化应激等。通常情况下，对于自噬的研究，除了发生的机制本身外，更多的是将自噬与各种生命活动或者疾病结合起来。比如研究自噬在肿瘤的发生发展，炎症反应，氧化应激等不同生物学功能的作用。
技术原理
自噬是细胞受到刺激后吞噬自身的细胞质或细胞器，最终将吞食物在溶酶体内降解的过程。自噬体（自噬体）为双层膜包被的圆形或椭圆形结构，内含细胞质，长寿蛋白质和异常蛋白聚集物，损伤或多余细胞器如线粒体，粗面内质网和微体，病毒和细菌等。
自噬过程：
1、细胞接受自噬诱导信号后，在胞浆的某处形成一个小的类似"脂质体"样的膜结构，然后不断扩张，被称为Phagophore。
2、Phagophore不断延伸，将胞浆中的任何成分，全部揽入，然后"收口"，成为密闭的球状的autophagosome，即"自噬体"。
3、自噬体形成后，可与细胞内吞的吞噬泡、吞饮泡和内体融合（这种情况不是必然要发生的）。
4、自噬体与溶酶体融合形成autolysosome，期间自噬体的内膜被溶酶体酶降解，2者的内容物合为一体，自噬体中的"货物"也被降解，产物（氨基酸、脂肪酸等）被输送到胞浆中，供细胞重新利用，而残渣或被排出细胞外或滞留在胞浆中。
实验方法
技术总结
一、自噬诱导剂
1、BredeldinA/Thapsigargin/Tunicamycin：模拟内质网应激
2、Carbamazepine/L-690，330/LithiumChloride（氯化锂）：IMPase抑制剂（即Inositolmonophosphatase，肌醇单磷酸酶）
3、Earle's平衡盐溶液：制造饥饿
4、N-Acetyl-D-sphingosine（C2-ceramide）：ClassIPI3KPathway抑制剂
5、Rapamycin：mTOR抑制剂
6、XestosponginB/C：IP3R阻滞剂
二、自噬抑制剂
1、3-Methyladenine（3-MA）：（ClassIIIPI3K）hVps34抑制剂
2、BafilomycinA1：质子泵抑制剂
3、Hydroxychloroquine（羟氯喹）：Lysosomallumenalkalizer（溶酶体腔碱化剂）
除了选用上述工具药外，一般还需结合遗传学技术对自噬相关基因进行干预：包括反义RNA干扰技术（Knockdown）、突变株筛选、外源基因导入等。
